ההבדל בין שיבוט ותת-שכבות | שיבוט לעומת Subcloning

ההבדל העיקרי - שיבוט לעומת Subcloning

שיבוט ו Subcloning הם תהליכים ביולוגיים מולקולריים אשר יוצרים תאים זהים גנטית או אורגניזמים הנושאים את ה- DNA או הגן כי הם עניין. שיבוט הוא טכניקה הכוללת שילוב של הגן המעניין או ה- DNA לתוך וקטור, שכפול של אותו בתוך חיידק מארח, וייצור של תאים או אורגניזמים שהם עותקים מדויקים של האיבר הגנטי. Subcloning היא טכניקה הכרוכה בהכנסת הגן של עניין, אשר כבר הוכנסו לתוך וקטור, לתוך וקטור משני, שכפול של אותו בתוך חיידק המארח, וייצור עותקים זהים גנטית של תאים או אורגניזמים. ההבדל העיקרי בין שיבוט ו subcloning הוא כי, ב שיבוט, הגן של עניין, פעם ligated לתוך וקטור, להמשיך את תהליך השיבוט ואילו, subcloning, הגן משובטים כבר עניין מופרד וקטור ההורים מוכנס שוב לתוך וקטור נמען וממשיך את התהליך .

-> ->

תוכן

1. סקירה והפרש מפתח

2. מה זה שיבוט

3. מהו Subcloning

4. השוואה בין-צדדית - שיבוט נגד Subcloning

5. סיכום

מהו שיבוט?

שיבוט הוא הנוהל שמייצר אורגניזמים או תאים זהים מבחינה גנטית. בטבע, שיבוט קורה באמצעים של רבייה מינית. כאשר אין recombination או שינוי גנטי, תאים הבת לקבל את אותו המבנה הגנטי של ההורה. אורגניזמים פרוקריוטים ואוקריוטים יוצרים שיבוטים על ידי ביקוע בינארי, נביטה, מיטוזה וכו '. בביולוגיה מולקולרית, שיבוט גנים או שברי דנ"א ספציפיים הוא שיטה פופולרית לחקר המבנה והתפקוד של אותו קטע דנ"א מסוים.

המטרה העיקרית של שיבוט מולקולרי היא ליצור מיליוני עותקים של תאים או אורגניזמים זהים מבחינה גנטית הנושאים את קטע ה- DNA של עניין (בעיקר גנים). הוא יוצר אורגניזמים עם עותקים גנטיים מדויקים של אחר. בראש ובראשונה, גנים ספציפיים משוכפלים במחקרים מולקולריים כדי להשיג מידע מבני ופונקציונלי ולרצף דנ"א. כמו כן, לייצור חלבונים או מוצרים ספציפיים בקנה מידה גדול, שיבוט נעשה שימוש נרחב.

הליך שיבוט

השלבים הבסיסיים של שיבוט ההליך הם כדלקמן.

זיהוי ובידוד של הגן המעניין. (הגברה של הגן של עניין על ידי PCR).

1. עיכול הגבלה של הגן של עניין (הגבלת endonuclease לחתוך את הגן).
2. עיכול הגבלה של דנ"א וקטור.(וקטור DNA הוא חתך גם באמצעות endonuclease הגבלה אותו).
3. הכנסת הגן לתוך הווקטור והיווצרות המולקולה הרקומביננטית.
4. טרנספורמציה של וקטור רקומביננטי לתוך חיידק המארח.
5. בידוד וזיהוי של החיידקים שהשתנו (וקטור פלסמיד צריך להכיל גן הניתן לבחירה, בדרך כלל גן עמידות לאנטיביוטיקה כדי לבדוק את החיידקים שהשתנו).
6. ביטוי גנים רקומביננטי בתוך המארח.
7. Figure_01: שיבוט נוהל

מהו Subcloning?

Subcloning הוא הליך של העברת גן של עניין מ וקטור אחד וקטור אחר כדי לראות את הביטוי של הגן כדי לקבל את הפונקציונליות הרצויה של הגן. בשיטה זו, שני וקטורים מעורבים; כלומר, וקטור הורה וקטור יעד. מוסיף משובטים מועברים שוב לתוך וקטור השני subcloning. המטרה של העברת הגן מהווקטור הראשון לווקטור השני היא להשיג משהו שלא ניתן לעשות על ידי הווקטור הראשון או להפריד את הגן שוב בתוך קטע הדנ"א המשוכפל כבר ולהביע אותו לבדו. אנזימי הגבלה משמשים בהליך זה בהתחלה.

הליך משנה משנה

השלבים הבסיסיים של תת-שכבות הם כדלקמן.

בעזרת endonucleases הגבלה, הפרדת ה- DNA של עניין התורם פלסמיד (וקטור הורה).

1. הגברה של ה- DNA של עניין באמצעות PCR.
2. טיהור של המוצר PCR (DNA של עניין) על ידי ג'ל אלקטרופורזה.
3. פתיחת פלסמיד הנמען על ידי endonucleases הגבלה אותו המשמש להפריד DNA של עניין האב פלסמיד.
4. קשירת ה- DNA של עניין (גן) לתוך פלסמיד הנמען ליצור פלסמיד subcloned.
5. טרנספורמציה של וקטור subcloned לתוך חיידק המארח המוסמכת.
6. הקרנת תאים הופכים.
7. טיהור של ה- DNA פלסמיד ושימוש רצף DNA או ביטוי של הגנים כדי להשיג את המוצרים הרצויים.
8. Subcloning מתבצע במקרים של בידוד גן אחד מן הקבוצה משובטים של גנים או כאשר הגן של עניין נדרש להעביר לתוך פלסמיד שימושי כדי לראות את הפונקציה המדויקת של הגן של עניין.

Figure_02: Subcloning נוהל

מה ההבדל בין שיבוט ו Subcloning?

- דיפר סעיף ביניים לפני טבלה ->

שיבוט לעומת Subcloning

שיבוט הוא הליך המייצר אורגניזמים זהים או תאים זהים גנטית.
Subcloning הוא הליך של העברת גן של עניין מ וקטור אחד וקטור אחר כדי לראות את הביטוי של הגן כדי לקבל את הפונקציונליות הרצויה של הגן.	תהליך
הפרד את ה- DNA של עניין מן האורגניזם והוכנס לתוך וקטור פעם אחת משובטים
DNA משוכפל כבר מופרד מן וקטור הראשון ומוכנס לתוך וקטור השני משובטים.	הכנס תנועה דרך וקטורים
לא מזיז מוסיף (DNA של עניין) מקטור אחד לווקטור אחר.
הזזת הוספה מקטור הורה לקטור יעד.	סיכום - שיבוט לעומת Subcloning

שיבוט יוצר תאים זהים גנטית או אורגניזמים עם הגן שהוכנס או DNA של עניין.זה מתקדם דרך הפרדה והכנסת ה- DNA של עניין לתוך וקטור וביטוי בתוך חיידק המארח. Subcloning משתף צעדים דומים עם שיבוט. עם זאת, ב subcloning, שקע DNA כבר משובטים (גן של עניין) מוכנס לתוך וקטור והפך חיידק המארח. זהו ההבדל העיקרי בין שיבוט ו subcloning.

הפניות

Lodish, Harvey. "שיבוט דנ"א עם וקטורים פלסמיד. "ביולוגיה תא מולקולרית. מהדורה 4. הספרייה הלאומית לרפואה, 01 בינואר 1970. 05 מרס 2017

1. "תת-כותרת. "ויקיפדיה. קרן ויקימדיה, 14 בפברואר 2017. אינטרנט. 06 מרס 2017
2. "תת-כותרת. "Subcloning | מאמרים Open Access כתבי עת של Access Access פרוטוקולים עורכים | מחברים | סוקרים | אירועים מדעיים. נ., n. ד. אינטרנט. 06 מרץ, 2017
3. Wackerhage, הנינג. "איך תת. "איך תת. נ., 01 ינואר 1970. אינטרנט. 06 מרס 2017
4. תמונה באדיבות

נוהל שיבוט מולקולרי - על ידי CNX OpenStax [CC BY 4. 0], באמצעות Wikimedia Commons

1. נוהל Subcloning - על ידי מעלה הסרט המקורי היה Takometer ב Wikipedia (הועבר מ en. wikipedia to Commons.) [CC BY 2. 5], באמצעות Wikimedia Commons