ההבדל בין RT PCR ו- QPCR

ההבדל העיקרי - RT PCR לעומת QPCR

תגובת שרשרת פולימראז היא טכניקה המשמשת להגברת אזור מסוים של DNA במבחנה . בשל המצאת הטכניקה הזו על ידי קארי מוליס בשנת 1983, מדענים מסוגלים לעשות אלפי למיליוני עותקים של שברי DNA ספציפיים למטרות מחקר. כיום הוא הפך להיות טכניקה נפוץ ו שגרתי שבוצע במעבדות קליניות ומחקר עבור מגוון רחב של יישומים. יש וריאציות של טכניקה מסורתית PCR כגון RT PCR, PCR מקונן, PCR multiplex, Q PCR, RT - QPCR, וכו 'RT PCR ו- Q PCR הם שתי וריאציות חשובות של PCR. ההבדל העיקרי בין RT PCR ו Q PCR הוא כי RT PCR משמש כדי לזהות ביטוי גנים באמצעות יצירת DNA משלים (cDNA) תמלילי מ RNA תוך Q PCR משמש כדי למדוד כמותית את מוצרי ה- PCR בזמן אמת באמצעות צבעים ניאון.

-> ->

תוכן
1. סקירה והפרש מפתח
2. מהו RT PCR
3. מה זה QPCR
4. השוואה בין-צדדית - RT PCR לעומת QPCR
5. סיכום

מהו RT PCR?

הפוך שעתוק polyryase תגובת שרשרת (RT PCR) הוא גרסה של PCR אשר משמש כדי לזהות ביטוי RNA. זוהי שיטה חשובה מאוד לאיתור ביטוי mRNA ברקמות. RT PCR מועסק כאשר החומר המוצא של המדגם הוא RNA. ב RT PCR, mRNA את התבנית הוא הראשון המרה לדנ"א משלימים. צעד זה הוא מזרז על ידי transcriptase אנזים הפוך התהליך ידוע בשם שעתוק לאחור. שנית, PCR המסורתית מועסק עבור cDNA מסונתז החדש עבור הגברה.

RT PCR היא טכניקה רגישה מאוד אשר דורש כמות קטנה יחסית של מדגם RNA. RT PCR הוא נפוץ באבחון וכימות של מינים RNA, במיוחד וירוסים RNA כגון וירוס החיסונים האנושי הפטיטיס C וירוס.

איור 01: RT PCR טכניקה

-> ->

מהו QPCR?

כמותי PCR (QPCR) הוא גרסה של PCR אשר משמש למדוד כמותית את מוצרי ה- PCR. זה נקרא גם בזמן אמת התגובה שרשרת פולימראז מאז הוא מודד את הגברה של זמן אמת באמצעות PCR בזמן אמת מכונה. זוהי שיטה מתאימה לקביעת כמות רצף היעד או הגן הנוכחי במדגם. התכונה המעניינת של QPCR היא שהיא משלבת הן הגברה והן כימות אמיתי לתוך צעד אחד. לכן, הצורך ג 'ל אלקטרופורזה בזיהוי ניתן לבטל על ידי טכניקת QPCR. QPCR משתמש בצבעים ניאון לתווית מוצרי PCR במהלך התגובות PCR אשר בסופו של דבר להוביל לכימות ישירה.כאשר המוצרים PCR להצטבר, אותות ניאון צוברים גם הוא יימדד על ידי מכונת בזמן אמת. QPCR ניתן לשלב עם RT PCR. זה נקרא RT - QPCR או QRT - PCR והוא נחשב ככלי רב עוצמה, רגיש וכמותי לזיהוי של רמות RNA בתאים או ברקמות.

SYBR גרין ו Taqman הן שתי שיטות המשמשות כדי לזהות או לצפות בתהליך הגברה של PCR בזמן אמת. SYBR שיטה ירוקה מתבצעת באמצעות צבע ניאון הנקרא SYBR ירוק מזהה את הגברה על ידי מחייב את הצבע לייצר DNA כפול תקועים. Taqman מתבצעת באמצעות בדיקות שכותרתו כפול מזהה את ההגברה על ידי השפלה של בדיקה על ידי פולימרז Taq ומשחרר של fluorophore כפי שמוצג בתרשים 02. שתי השיטות לפקח על התקדמות תהליך ההגברה ולדווח על כמות של המוצר בזמן אמת .

בזמן אמת PCR יש מגוון רחב של יישומים כגון כימות ביטוי גנטי, microRNA ו noncoding ניתוח RNA, genotyping SNP, זיהוי של גרסאות מספר עותק, זיהוי של מוטציות נדירות, זיהוי אורגניזמים מהונדסים גנטית, זיהוי של זיהומיות סוכנים, וכו '

איור 02: טכניקה כמותית PCR

מה ההבדל בין RT PCR ו QPCR?

- דיפר סעיף ביניים לפני טבלה ->

RT PCR לעומת QPCR

RT PCR היא טכניקה המשמשת כדי לזהות ביטוי גנים על ידי הגברה. QPCR היא טכניקה אשר מגביר DNA ו מכמת את מוצרי ה- PCR בזמן אמת.
מעורבות אנזים Transcriptase הפוך
אנזימים הפוכה transcriptase משמש RT PCR. תעתיק אנזים הפוך אינו משמש עבור QPCR.
שימוש מולקולות תווית fluorescently
צבעים fluorescently שכותרתו או בדיקות אינם משמשים עבור RT PCR. צבעים או פלואורסצנטי מסומן שכותרתו משמשים QPCR.
כימות המוצר PCR
אלא אם כן מצמידים עם QPCR, RT PCR אינו לכמת את המוצר PCR. QPCR כמותי למדוד את המוצר PCR.
החל חומר
חומר המוצא הוא mRNA. חומר המוצא הוא DNA.
סינתזה של cDNA
משלים DNA מיוצר במהלך RT PCR. DNA משלים אינו מיוצר במהלך QPCR.

סיכום - RT PCR לעומת QPCR

RT PCR ו- QPCR הן שתי גרסאות של PCR מסורתיים. RT טכניקה PCR מבוצע עבור דגימות mRNA והוא מונע על ידי שעתוק לאחור הייצור של cDNA. QPCR משמש לכמת מוצרים PCR בזמן מחזורי מחזורי PCR בזמן אמת באמצעות צבעים ניאון או בדיקות שכותרתו. ב QPCR, כמות המוצר PCR מיוצג על ידי האותות פלואורסצנטי הנפלטים על ידי המדגם. RT PCR הוא בשימוש העממי כתהליך הגברה בעוד QPCR הוא נפוץ כמו תהליך כימות. זהו ההבדל בין RT PCR ו QPCR.

הפניות:
1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, ג 'אורוס, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo, ו GK Agrawal. "בזמן אמת PCR: מהפכה איתור וניתוח ביטוי של גנים. "גנומיקה עכשווית.Bentham מדע שותפים בע"מ, יוני 2007. אינטרנט. 03 אפריל 2017
2. זיקה, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, אלס דה סמט, קלוד א Cuvelier, פיטר Mestdagh, וג 'ו Vesesompele. "פשוט רגיש RT-qPCR מבוסס ביטוי גנים ניתוח של דגימות FFPE. "חדשות טבע. קבוצת ההוצאה לאור, 22 בפברואר 2016. 03 אפריל 2017
3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon ו- C. Mathieu. "השימוש בזמן אמת transcriptase transcriptase PCR עבור כימות הביטוי ציטוקינים גנים. "כתב העת של Biomolecular טכניקות: JBT. איגוד מתקני Biomolecular משאבים, מר 2003. אינטרנט. 03 אפריל 2017

Image באדיבות:
1. "טאקמן" על ידי משתמש: Braindamaged - עבודה של העלית המקורית (Public Domain) באמצעות Commons Wikimedia
2. "Reverse Transcriase polymerase התגובה שרשרת" על ידי Jpark623 - עבודה לבד (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia