ההבדל בין SYBR Green ו Taqman | SYBR גרין נגד Taqman

ההבדל העיקרי - SYBR גרין לעומת Taqman

SYBR גרין ו Taqman הן שתי שיטות המשמשות כדי לזהות או לצפות בתהליך הגברה של PCR בזמן אמת. SYBR גרין היא שיטה המבוססת על intercalating חומצה גרעין צבע מכתים בעוד Taqman היא שיטה המבוססת על בדיקה hydrolysis. שתי הטכנולוגיות נועדו לייצר הקרינה במהלך PCR, אשר מאפשר בזמן אמת PCR מכונת לפקח על התגובה "בזמן אמת". שיטת SYBR גרין מתבצעת באמצעות צבע ניאון הנקרא SYBR ירוק מזהה את הגברה על ידי מחייב את הצבע כדי לייצר DNA כפול תקועים. Taqman מתבצעת באמצעות בדיקות שכותרתו כפול מזהה את הגברה על ידי השפלה של בדיקה על ידי פולימרז Taq ומשחרר של fluorophore. זהו ההבדל העיקרי בין SYBR Green ו- Taqman.

-> ->

תוכן

1. סקירה והפרש מפתח

2. מה זה SYBR הירוק

3. מה טאקמן

4. השוואה של הצד - SYBR גרין נגד Taqman

5. סיכום

מהו SYBR גרין?

SYBR הירוק הוא צבע פלואורסצנטי המשמש חומצת חומצות גרעין, בעיקר DNA כפול תקועים בביולוגיה מולקולרית. SYBR שיטה ירוקה משמש לכמת מוצרים PCR בזמן אמת PCR. ברגע שהוא נקשר לדנ"א, מורכבות צבע ה- DNA המתקבל סופגת אור כחול ויורדת אור ירוק עז. זה קורה בגלל השינוי המבני המתרחש מולקולת צבע על הכריכה עם DNA כפול תקועים. כאשר PCR יוצר יותר ויותר DNA, יותר מולקולות צבע לקשור עם ה- DNA, לייצר יותר פלואורסצנטי. לכן, הקרינה עולה עם הצטברות המוצר PCR. לפיכך, כמות המוצר PCR ניתן למדוד כמותית על ידי זיהוי ירוק הקרינה SYBR.

-> ->

צבע ירוק SYBR יכול לשמש גם עבור תיוג ה- DNA cytometry ו מיקרוסקופ פלואורסצנטי. Ethidium bromide הוחלף בהצלחה על ידי SYBR גרין מאז ethidium bromide הוא צבע מסרטן עם בעיות סילוק במהלך הדמיה DNA ב ג'ל אלקטרופורזה.

יש יתרונות וחסרונות של השיטה הירוק SYBR. שיטה זו היא רגישה מאוד, זול וקל לשימוש. עם זאת, בשל יכולתו לאגד את כל גדיל DNA כפול, מחייב ספציפי יכול להוביל לכימות של המוצר PCR.

איור 01: SYBR טכניקה ירוקה

מה זה Taqman?

Taqman היא שיטה חלופית SYBR גרין לפקח על תהליך ה- PCR בזמן אמת. שיטה זו תלויה בפעילות 5 '- 3' exonuclease של אנזים פולימרז Taq כדי לבזות את בדיקות במהלך הרחבה של גדיל חדש ושחרור של fluorophore.בדיקות שכותרתו כפולה משמשים בשיטה זו והיא מבוססת על הידרוליזה של בדיקות. בדיקות הם fluigcently שכותרתו oligonucleotides DNA שיש מולקולה כתב פלואורסצנטי (fluorophore) בסוף 5 'ו מולקולה quencher בסוף 3'. הם נועדו לאגד את תבנית אחת תקועים בצד השני של anneals תחל. פולימרז Taq מוסיף נוקליאוטידים כדי פריימר ו מרחיב את החוט החדש כלפי בדיקות שכותרתו כפול. לאחר הפולימרז Taq עונה על בדיקה, פעולה exonuclease של הפולימרז Taq מפעיל ומשפיל את החללית. ברגע שזה משלים את הסינתזה של גדיל חדש, בדיקה נחשפת השפלה מלאה ולשחרר את fluorophore. שחרורו של fluorophore מייצר פלואורסצנטי. מולקולה פלואורסצנטי מרווה ביעילות מרווה את האור הנפלט ויוצר את הפלט עבור כימות של המוצר PCR. שחרור fluorophores וכמות של מוצרי ה- PCR הם פרופורציונליים. לפיכך, כימות ניתן לעשות זאת בקלות על ידי שיטת Taqman.

איור 02: שיטת Taqman

שיטת Taqman משמש בזמן אמת PCR, כימות ביטוי גנים, זיהוי של פולימורפיזמים גנטיים, כימות של מחיקות DNA כרומוזומליות, זיהוי חיידקים, אימות של ניתוח microarray, SNP genotyping וכו ' מה ההבדל בין ירוק SYBR לבין Taqman?

- דיפר סעיף בינוני לפני הטבלה ->

SYBR גרין נגד Taqman

SYBR גרין מבוסס על צבע DNA מחייב.
Taqman תלויים בדיקות הכלאה ו 5 'עד 3' פעילות exonuclease של פולימרז Taq.	בדיקות פלואורסצנטיות עם תווית
אין צורך בבדיקות עם תוויות ניאון.
בדיקות דו-תכליתיות נדרשות.	ניתוח גנים multiplex
זה לא יכול לשמש למטרות גנים multiplex.
זה יכול לשמש למטרות גנים multiplex.	עלות
זה פחות יקר.
זה יקר יותר.	ספציפיות
זה פחות ספציפי ונקשר עם כל DNA גדיל כפול
אלה הם ספציפיים במיוחד מאז בדיקות לזהות את מוצרי הגברה ספציפיים.	יעילות
זה פחות יעיל.
זה יעיל מאוד.	יישום
זה משמש בזמן אמת PCR, הדמיה ג'ל agarose, תיוג ה- DNA וכו '
זה משמש PCR בזמן אמת, כימות של ביטוי גנים, זיהוי של פולימורפיזם גנטי, וכו'	תקציר - SYBR גרין ו Taqman

Taqman ו SYBR ירוק הן שתי שיטות מועסקים בזמן אמת PCR (כמותי PCR). שתי השיטות לאפשר את כימות המוצר PCR ביעילות להסתמך על פליטת הקרינה. שיטת טאקמן משתמשת פעמיים בדיקות שכותרתו עבור זיהוי של DNA שנצבר בעוד שיטת SYBR גרין משתמש בצבע פלואורסצנטי. שתי השיטות הללו יש גם יישומים שונים בביולוגיה מולקולרית.

הפניה:

1. טאגאדיני, מוחמד חסן, מג'תבה פאנח'פור, ושאגאייג האג'וי ג'אוואנמאר. "השוואה של SYBR גרין שיטות TaqMan ב כמותי בזמן אמת פולימרז ניתוח תגובת שרשרת של ארבעה תת קולטן אדנוזין."מחקר ביו-רפואי מתקדם. Medknow פרסומים & מדיה Pvt בע"מ, 2014. אינטרנט. 13 מרץ, 2017.

2. "בזמן אמת PCR עקרונות בסיסיים. "Real Time PCR, כמותי (qPCR), Primers & Mastermix: Primerdesign בע"מ נ 'עמ', n. ד. אינטרנט. 13 מרץ, 2017.

3. "SYBR גרין אחרים Real-Time PCR צבעים. "ביוקומאר. נ., 05 אפריל 2010. אינטרנט. 14 מרץ, 2017

Image באדיבות:

1. "PCR עם SYBR ירוק" By YYonaar 23: 09, 7 מרס 2006 (UTC) - זה גרף ליצור על ידי Ygonaar עם נקודת כוח, CC BY-SA 3. 0, // commons. wikimedia. org / w / אינדקס. php? שריר = 619528

2. "טאקמן" משתמש: Braindamaged - עבודה עצמאית (Public Domain) באמצעות Commons Wikimedia